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凱氏定氮儀對不同物質蛋白質的測定試驗
點擊次數:1336 更新時間:2023-07-25

凱氏定氮儀是實驗室的常用設備,一般專用于食品、乳制品、飼料、農副產品等的蛋白質的測定。其中蒸餾部分是定氮儀的主要功能,本文通過對這部分的改進和利用,擴展了定氮儀新的新用途,發揮一機多用,讓我們更方便、快捷的用于檢測那些原本使用傳統方法來檢測的項目。如:揮發性鹽基氮、亞硫酸鹽、酒精、甲醛、揮發性酸、氨態氮以及精油、香精香料的萃取等。文章中還通過對比,匯總出凱氏法、直接蒸餾法測定各項目步驟和選用的各種試劑、指示劑。
  凱氏定氮儀是通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質含量的儀器,這種方法是由丹麥化學家凱耶達爾(Johan Kjeldahl)1883 年發明的??梢詼y定種子、糧食、乳制品、飼料、飲料、土壤、農副產品中的蛋白質以及化工、制藥行業的有機氮、化妝品中的尿素含量、環境分析的總氮等等。其中很重要的一步就是蒸餾,本文正是利用定氮儀的這部分裝置,匯總出能夠利用蒸餾法檢測的項目,為凱氏定氮儀擴展了新的用途。蒸餾裝置是通過熱蒸氣對樣品蒸餾,將反應后的蒸氣進行冷凝收集,然后滴定計算。對全自動定氮儀我們只需要利用直接蒸餾功能,將餾出液通過旁路收集到錐形吸收瓶里即可。對半自動定氮儀(不含滴定功能)直接就可使用。所以我們用這種方法省去樣品消化過程,直接用于檢測揮發性鹽基氮、亞硫酸鹽、酒精含量、甲醛、揮發性酸、肥料中的氨態氮以及香精香料的萃取等。
  1 揮發性鹽基總氮的測定
  揮發性鹽基總氮是肉食品新鮮度的一個主要指標,動物性食品(如:肉、魚類)由于酶和細菌的作用,在腐敗過程中,使蛋白質分解而產生氨以及胺類等堿性含氮物質(三甲胺和二甲胺),可引起食物中毒。
  此類物質具有揮發性,在弱堿(氧化鎂)性下能與水蒸氣一起蒸餾,將氮轉化成氨,用硼酸吸收,標準酸HCL 滴定。計算出揮發性鹽基總氮量。我國食品衛生標準中規定,當魚類揮發性鹽基氮的含量達到30mg/100g 時,即認為是變質。另外,在飼料工業的發酵過程,由于蛋白質分解而產生一些易揮發的含氮物質,這時揮發性鹽基氮含量會升高。例如:豆粕的揮發性鹽基總氮在發酵前含量在 30-50mg/100g,發酵后就會升高。由于魚粉等動物蛋白,是劣質魚粉的揮發性鹽基氮比較高,因此發酵豆粕類產品如果揮發性鹽基氮含量很高,可能是摻入劣質魚粉等動物蛋白或發酵過程中出現腐敗所致。檢測時用氧化鎂替代氫氧化鈉即可,其它步驟和凱氏法相同。
  2 食品、飲料中亞硫酸鹽的測定
  二氧化硫在食品工業是果汁、啤酒、紅酒、果脯、香腸、漢堡和蔬菜中被用作防腐劑,由于對健康的嚴重危害 EC 條例規定如果濃度 >10mg/kg 或10mL/L 進行標注。檢測時總的二氧化硫通過酸性(60% 磷酸)蒸氣蒸餾而被釋放,然后由過氧化氫溶液接收和氧化形成硫酸,用標準 NaOH 滴定(檢出限 5mL/L)。樣品前處理需經過搖動或超聲震蕩除去二氧化碳。
  3 酒中酒精含量的測定
  白酒、紅酒中的酒精 , 可以直接通過蒸氣蒸餾2min,得到餾出液被收集后調整到固定體積,酒精的濃度用光密度計測量。通常濃度在 10% 的標準液回收率 >99.4%.
  4 揮發性酸含量的測定
  揮發性酸是厭氧消化過程的中間產物,將樣品用磷酸酸化后,從中蒸發出揮發性酸,再用酚酞為指示劑,用 NaOH 滴定流出液。
  5 食品中游離甲醛含量的測定
  吊白塊學名甲醛次硫酸氫鈉,易溶水,半透明白色物,高溫下具有很強的還原性,遇酸堿分解,有漂白作用可用作增白劑,常被非法添加到食品加工中,如腐竹、豆制品等。該物 60℃以上分解有害物質,120℃分解為甲醛、二氧化硫、硫化氫毒氣,使人過敏、刺激腸道,10g 能使人致死。原理:樣品經酸(磷酸)化后,次硫酸氫鈉甲醛中的甲醛被釋放出來,經水蒸氣蒸餾,收集后的吸收液中的甲醛與乙酰丙酮及胺離子反應生成黃色物質(3,5- 二乙?;?-1,4-二氫盧剔啶),在 435nm 有吸收,用分光光度計測定甲醛含量。檢測時好選用較大的(750mL)蒸餾瓶蒸餾樣品,防治樣品的漂浮物被蒸氣帶出,同時控制好蒸汽量不要太大。
  6 肥料中氨態氮含量的測定
  氨態氮是指樣品中的 NH3中的 N 元素。有機肥和無機肥中的氨態氮,在堿性水蒸氣中分解為氨,硼酸吸收后用鹽酸滴定就可計算出氮的含量。實際上就是不需消化樣品的凱氏法。若在蒸餾時適當加些不含 MgO 的碳酸鹽效果更好。測定步驟和凱氏法一樣。
  以上匯總了凱氏定氮儀的新應用,其具體分析方法可參考國標的內容。通過表 1 的對比可以方便看出各步驟之間的關系。
  在實際應用中我們可以根據情況對不同廠家的儀器進行改進,來符合我們的應用要求。例如:用可控硅器件改變蒸汽發生器的加熱功率和速率,來控制蒸氣量,平穩蒸餾過程讓反應更充分;選擇合適的蒸餾管,消除蒸餾過程樣品的漂浮和掛壁現象等,這樣測得的結果就會更準確。對于像精油、香精香料的萃取也可以借鑒蒸餾裝置進行制備。

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